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    BD流式细胞仪Z常见的几种检测方式
    点击次数:393 发布时间:2017-08-07
     
      一、BD流式细胞仪测定用乙醇固定的DNA的含量
      1、培养细胞的DNA含量的测定
      制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中;加入2ml预冷的70%乙醇,4℃保存;
      细胞固定的一般步骤为:
      1)取单细胞悬液1~2×106个细胞于PBS(PH=7.2)缓冲液中;
      2)300g离心5分钟,弃上清,反复两次;
      3)重悬细胞于0.5ml PBS缓冲液中;
      4)将细胞悬液放置于2~3ml冷70%乙醇中,混匀,保存于4℃,至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。
      注意:
      ·根据实验的要求,固定剂也可选用1~3%多聚甲醛;
      ·将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至0~4℃;
      ·细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加,并不断震摇,以免细胞成团。
      ·300g离心5分钟,去上清,再重悬于400μl PBS中;
      ·显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤;
      ·加入PI,避光孵育30分钟;
      ·上BD流式细胞仪检测。
      2、新鲜组织的DNA含量的测定
      1)用200mg湿重组织用机械法制成单细胞悬液;
      2)500g离心5分钟;
      3)弃上清,重悬于10ml染色-去污剂中;
      4)再过滤,用200目的筛网或70~80μm的筛网过滤;
      5)上BD流式细胞仪检测。
      3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定
      1)从石蜡包埋切取切片50μm厚,2~3片,制成单细胞悬液;
      2)用PBS缓冲液洗涤,500g离心5分钟,弃上清;
      3)加入PI液1ml室温避光30分钟;
      4)调整细胞浓度为1×106/ml;
      5)上BD流式细胞仪检测。
     
    北京科誉兴业科技发展有限公司(www.bntkq.tw)主营Micro17R/21R离心机,Eppendorf5424R离心机,Bio-Rad伯乐C1000,T100PCR仪,Leica DMi1倒置显微镜
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