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    BD C6流式细胞仪测定细胞周期的步骤
    点击次数:541 发布时间:2017-03-21
     BD C6流式细胞仪测定细胞周期的步骤:
     
    1)将细胞以1×106接种于60mm培养板,80%汇合后转染,或者按照计划的方案处理。
     
    2)24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素(真核表达载体上的抗性标记)进行培养(该步可选)。
     
    3)48-72小时后用胰酶消化(或者用细胞刮子)收集细胞,PBS(加入FBS使终浓度为1-3%)洗两遍,弃上清,加入1ml70%预冷乙醇中,吹打均匀,-20℃或4℃固定12小时以上。
     
    4)PBS(加入FBS使终浓度为1-3%)洗涤去乙醇,1000rpm,5min,洗两遍。
     
    5)0.5mlPBS重悬细胞,加入PI和RNaseA至终浓度50?g/ml,37℃(或室温下)温浴30min。
     
    6)用BD C6流式细胞仪测定周期。
     
    PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
     
    RNaseA:10mg/ml
     
    应用:通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数,可检测细胞的增殖、凋亡。
    北京科誉兴业科技发展有限公司(www.bntkq.tw)主营Micro17R/21R离心机,Eppendorf5424R离心机,Bio-Rad伯乐C1000,T100PCR仪,Leica DMi1倒置显微镜
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